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推进BRAF基因突变检测 提高临床肿瘤诊疗水平

人阅读 发布时间:2021-01-27 16:04

推进BRAF基因突变检测 提高临床肿瘤诊疗水平

 

“中华医学会病理学分会第二十一次学术会议暨第五届中国病理年会”期间,中国医学科学院肿瘤医院病理科应建明教授分享了BRAF基因突变检测在甲状腺癌、结直肠癌等实体瘤鉴别诊断、治疗指导及预后管理方面的重要意义,以及免疫组化BRAF V600E抗体检测方法的临床应用。

 

BRAFV600E突变检测助力结直肠癌的鉴别诊断、治疗指导和预后管理

根据WHO数据,结直肠癌(CRC)位列男性常见恶性肿瘤第三位和女性常见恶性肿瘤第二位,约5%~15%结直肠癌会发生BRAF位点特异性突变,其中超过90%为BRAF V600E突变。

BRAF V600E突变可排除林奇综合征(LS),指示为散发型结直肠癌(SCRC)。BRAF V600E检测有效简化了LS诊断流程,采用错配修复基因(MMR)蛋白免疫组化染色法筛查疑似患者。若MMR蛋白表达正常,可排除LS;MMR蛋白表达缺失时,需具体分析MLH1、MSH2、MSH6及PMS2四种蛋白表达情况。如MLH1缺失,则进行BRAF突变分析,若为V600E阳性预示很可能患有SCRC。欧洲临床肿瘤学会(ESMO)和美国国立综合癌症网络(NCCN)指南建议,MLH1基因缺失时应检测BRAF V600E以排除SCRC。

BRAF V600E还可帮助临床医生进行CRC预后管理和指导治疗。BRAF V600E突变导致CRC患者预后不良概率提升,尤其晚期患者V600E突变阳性预示预后非常差。尽管尚存在争议,目前有限资料提示,V600E突变患者抗EGFR单抗治疗应答率明显低于BRAF野生型患者。

BRAF V600E检测有效辅助甲状腺癌诊疗及预后

对于甲状腺癌,BRAF V600E突变发生在40%~70%甲状腺乳头状癌(PTC)中,而在甲状腺滤泡状腺癌(FTC)、甲状腺髓样癌(MTC)和良性甲状腺增生等中极少发现,BRAF V600E可作为PTC临床鉴别诊断指标。因BRAF V600E与PTC恶性特征具有相关性,与肿瘤大小等高风险特征呈正相关,可辅助PTC诊断。采用甲状腺细针穿刺活检(FNAB)与BRAF V600E联合检测进行PTC诊断,敏感性可提升至80%。美国甲状腺协会(ATA)管理指南建议,甲状腺结节患者在细胞学活检不确定时,建议使用分子标志物(如BRAF、RAS、RET/PTC等)辅助诊断。

BRAF V600E突变与PTC侵袭性及不良预后有关,可为PTC治疗提供参考。术前检查PTC的BRAF V600E基因突变可辅助预测术后复发风险、指导手术切除范围及术后后继治疗。NCCN2014年第2版甲状腺癌指南指出,肿瘤的组织学类型、肿瘤大小、局部浸润及坏死、血管浸润以及BRAF基因突变状态和转移是影响预后的重要变量。

免疫组化BRAF V600E(VE1)抗体检测优化多项肿瘤诊断

近几年来,免疫组化技术(IHC)用特异性抗体VE1识别V600E突变蛋白进行检测,正逐渐成为当前BRAF基因突变常用检测方法。第一届中美肿瘤诊断病理高峰论坛期间,美国盖辛格健康系统机构(Geisinger Health System)免疫组化实验室主任陈宗明博士分享了一项对比IHC染色与分子生物学检测方法研究。陈宗明博士表示:“进行BRAF V600E IHC检测的关键在于确保检测质量。以CRC诊断为例,BRAF特异性突变IHC检测可通过IHC结果指导测序,具有更优的成本效益比。建议将BRAF V600E IHC检测应用于LS、PTC等筛查,并定期评估其与分子生物学检测间的一致性,做好质评与质控。”

2015年3月,《Nature》杂志《Scientific Reports》子刊发表了中国医学科学院肿瘤医院应建明教授团队的研究,文章深入研究了Sanger测序、RT-PCR及IHC三种方法学在检测实体瘤BRAF V600E突变中的一致性,使用罗氏诊断BRAF V600E(VE1)抗体,在VentanaBenchMark全自动染色平台进行IHC检测。779例患者中,150例VE1染色阳性。对349例患者进行Sanger测序及RT-PCR(cobas® 4800)检测(包括150例VE1阳性病例)显示,IHC方法学灵敏度和特异性分别为100%和99%,可作为BRAF突变检测很好的初筛工具,并指导预后和治疗方案。

作为率先用于体外诊断BRAF突变的即用型抗体,罗氏诊断BRAF V600E(VE1)抗体联合OptiViewDAB IHC检测试剂盒,对检测多种肿瘤中单细胞水平BRAF V600E突变具有良好的敏感度和特异性。与现有分子检测相比,BRAF V600E(VE1)抗体一种检测即可适用于结直肠癌、甲状腺癌、毛细胞白血病与其他多种癌症中的BRAF V600E突变蛋白诊断,为解剖病理实验室提供快速、准确的检测结果。

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